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本制品是在探针法qPCR Mix基础上改进的产品，可以直接用唾液为模板进行PCR扩增，不需要任何DNA纯化过程。

• 以2×预混液形式提供，用户只需准备模板、引物和探针即可以进行探针法实时定量PCR。
  
• 直接以唾液为模板，不需要任何DNA纯化和释放过程。
  
• 唾液用量可高达到总反应体积的35%，20μL体系可以用7μL唾液，避免了漏检。
  
• 灵敏度高，可以检测10拷贝的DNA/反应。
  
• 提供足够8次的阳性对照引物、探针和模板。
  
• 可用于基因表达分析、SNP分析、拷贝数分析等实验。也可以用于定性检测。
  
• 本制品反复冻融20次对扩增效果没有任何影响。

• 如果有N个样品，则设置N+2个反应，多出的一个是扩增阴性对照（NC），一个是扩增阳性对照（PC）。可以使用确认能被所用引物和探针扩增并检测的DNA作为阳性对照。本试剂盒提供少量人基因组DNA溶液为阳性对照。在N+2个PCR管中按下表设置PCR反应：
  

  成分	N个样品管	NC管	PC管
  2×唾液直接PCR预混液(探针法)	各10μL	10μL	10μL
  自备引物对(10μM each)	各2μL	2μL	2μL
  自备探针(5μM)	各1μL	1μL	1μL
  N个唾液样本	各1～7μL	-	-
  人基因组DNA溶液	-	-	7μL
  超纯水	至20μL	至20μL	至20μL

• 放入荧光PCR仪中进行扩增，下表的扩增参数仅供参考。具体需要以使用的引物探针Tm和靶分子长度进行调节。
  
  • 一般选择三步法PCR：
    

    步骤	温度	时间	备注
    预变性	95℃	5分钟
    PCR反应 (35-45循环)	95℃	15秒	靶分子长度最好在80～200bp
    	55～65℃	15～30秒	在此步采集荧光信号，通道根据标记染料决定。本试剂盒提供的阳性对照探针采用的FAM标记。
    	72℃ 30秒

  • 如果引物Tm值接近60℃，也可以选择两步法PCR：
    

    步骤	温度	时间	备注
    预变性	95℃	5分钟
    PCR反应 (35-45循环)	95℃	15秒	靶分子长度最好在80～200bp
    	60℃	60秒	在此步采集荧光信号，通道根据标记染料决定。本试剂盒提供的阳性对照探针采用的FAM标记。

• 数据处理：一般情况下，阴性对照Ct大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。如果在35～40之间，则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性，如果小于40，则为阳性。本试剂盒提供的阳性对照。